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InCellis:助力乳腺腫瘤原代細胞的遷移分析
來源: Admin    更新時間: 2019-12-19    瀏覽: 205 人次



目前研究人員越來越關注污染物作為導致癌癥的關鍵因素,除草劑已經被報道,其可以通過修飾DNA的甲基化來改變人類基因組的表達。此外,草甘膦作為除草劑的一種,已被證實可以通過調控雌激素產生途徑來促進人乳腺腫瘤細胞的增殖。本篇應用中使用法國Bertin公司的細胞智能成像系統InCellis研究了草甘膦對乳腺腫瘤細胞的影響。


本篇應用主要比較使用草甘膦誘導的乳腺腫瘤原代細胞和乳腺癌細胞系的遷移實驗分析,其中Incellis細胞智能成像系統無需胰蛋白酶消化,無需標記即可完成遷移分析。


實驗材料

InCellis細胞智能成像系統(法國Bertin公司);MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌細胞系,草甘膦誘導的乳腺腫瘤原代細胞Glypho-iBPCTC;


實驗步驟

1.將3x105細胞接種到6孔板里,培養至融合度達到80%-90%,使用10μg/ml絲裂霉素C(Sigma公司)處理2h(阻止細胞增殖);

2.使用雙孔硅膠(Ibidi公司)插入到細胞進行細胞單層的劃痕處理;

3.使用InCellis來記錄細胞遷移的圖像,在不同的時間點(0、4、8、24、28、32、48h)對每個樣品進行拍照定量分析;

4.對于每個圖像,使用InCellis的軟件測量功能,對傷口的兩側進行距離的測定,沿著傷口進行10次記錄,細胞的平均遷移速度通過計算隨時間的推移,距離與時間的比值來獲得。

5.使用InCellis也可以在劃痕實驗中對圖像進行融合度的分析。


實驗結果



如圖1所示,MCF-7、MDA-MB-231和Glypho-iBPCTC三種細胞進行了劃痕實驗,左邊結果為0、8、32h捕獲的圖像;右邊結果為三種細胞的遷移速率(μm/h);結果表明使用草甘膦誘導的乳腺腫瘤細胞的遷移速率最低。



圖2所示為Glypho-iBPCTC細胞在劃痕實驗之后的成像圖片,其中可以使用InCellis的細胞融合度計算功能,對細胞遷移的細胞計算融合度。




實驗結論


細胞劃痕實驗結果表明使用草甘膦誘導的乳腺腫瘤細胞比MCF-7、MDA-MB-231這兩種細胞系的遷移速率低,InCellis細胞智能成像系統可以輕松記錄細胞遷移,同時也可以在幾分鐘內完成細胞融合度的計算。



使用InCellis,無需標記,無需侵入性的處理,直接可以直接在工作臺上進行圖像分析,是監測原代細胞培養理想的工具。



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